單克隆抗體制備的基本原理與過程

　　單克隆抗體細胞在體外培養時通常使用合成培養基，再添加胎牛血清配成培養基。但是血清中成分復雜,這對純化單克隆抗體來說是個難題, 而低純度的單克隆抗體用于臨床治療可能導致一系列反應。同時,血清來源有限,各批量間質量差異大,直接影響雜交瘤細胞的連續性培養。
 

　　單克隆抗體制備的基本原理與過程：
 

　　原理：
 

　　B淋巴細胞在抗原的刺激下,能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力、B細胞的這種能力和量是有限的,不可能持續分化增殖下去，因此產生免疫球蛋白的能力也是微小的、將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養或注入小鼠體內即可獲得大量的單一的特異性抗體.這種技術即稱為單克隆抗體技術。
 

　　制備的過程：
 

　　免疫動物
 

　　免疫動物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液循環或淋巴循環進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細胞。
 

　　細胞融合
 

　　采用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，制備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，并加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。