多克隆抗體制備實驗方法

　　多克隆抗體制備主要是哺乳動物和禽類，如兔、綿羊、山羊、鼠、馬等。動物選擇根據抗體的用途和量來決定，也與抗原的性質有關。如需要大量的抗體，則用大動物；如要獲得直接標記診斷的抗體，則用本種動物；如要獲得間接標記診斷的抗體，則用異源動物；如抗原量少，且難獲得，則用純系小鼠；一般實驗室用抗體，多用兔或鼠。對于用于診斷的抗體，建議用動物通常選年輕、健康的雄性動物，懷孕的雌性動物一般不用于制備抗體。
 

　　多克隆抗體制備實驗方法：
 

　　⒈ 抗原的制備
 

　　抗原制備的主要目的在于在免疫動物體內產生強、適當的抗體。由于純化的抗原適合產生抗體，因此在注射前通常采用一些經典的方法，比如柱層析、分級萃取、亞細胞分離等進行抗原的分離和純化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中為可見的單一帶，抗原從凝膠中的抽提可作為純化的步驟。
 

　　⒉ 預放血
 

　　輕輕的將兔子放在特制兔盒中，處于放松狀態(tài)的兔子采血會較容易。按壓兔子耳根部直至血管突出,然后將針頭插入耳部血管的中上部，觀察到進針后小心推出活塞收集血液1ml -5ml。結束收集后，退出針頭并按壓傷處以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒溫箱中放置30分鐘以防止激活補體系統(tǒng)，再將試管在4°C 放置過夜使血液凝固。用藥鏟將血凝塊從管壁上撥落，將血液轉移至塑料離心管中，4°C，10,000g離心10分鐘，收集上清液在4°C保存。